使用Elisa试剂盒进行实验的正确操作方法
第一步:准备实验材料
在进行Elisa试剂盒实验前,必须要确认已经准备好了实验需要的所有材料。这些材料包括:样本、标准品、缓冲液、洗涤液、底物液、停止液、试纸板和微量自动取样器等。在使用试剂盒的过程中,所有材料的质量都会对实验结果产生影响,因此材料的制备要仔细、精确。此外,都必须经过严格的质检程序,以确保试剂盒的稳定性和可靠性。在使用Elisa试剂盒前,还需保证实验环境无菌且实验前必需穿戴好实验防护服及手套、口罩和护目镜等个人防护装备。
第二步:进行前处理
在Elisa试剂盒实验前,要进行必要的前处理工作,即对样本进行初步预处理。这一步主要是为了减少样本内部异物的影响,对于不同的样本预处理的具体方法不完全相同,但对于每一种试剂盒都提供了详细的操作方法步骤。例如,如果需要anti-cyclic citrullinated peptide(抗cyclic citrullinated peptide)检测,那么就需要将血液样本离心分离血清,过滤掉杂质后,再按照试剂盒说明的步骤进行反应。
第三步:操作实验步骤
第三步是最为关键的操作环节,需要认真仔细地按照试剂盒说明进行各项操作,遵循以下步骤:
1.反应板贴
用手将试纸板取出,将每个酶标板上的反应孔用贴纸封盖,加入所需体积的标准品、控制品和样本。然后通过微量自动取样器或移液器,分别加入缓冲液,在加入促进素,混匀后孵育。
2.洗涤
取出已经培养的样品,倒出反应孔中的液体,用洗涤液洗涤3~5次,从而将反应孔中的杂质等骨浆洗净。加洗涤液至满孔都进行吸出管放在吸注板中。加入一定滴数的洗涤液,让其在反应孔内停留2~3秒钟,之后再吸出反应孔内的洗涤液。
3.加底物
用洗涤液冲洗完去除孔板上的洗涤液残留后,加入底物液送入反应孔,可见反应孔中液体开始变为蓝色或黄色,然后加入停止液,停止颜色变化,并且通过读板仪器获取相应的数据。
以上就是Elisa试剂盒操作的具体方法,有需要进行实验的科研工作者们,一定要认真学习掌握操作技巧,避免疏漏出现误差造成实验失败。同时,科研工作者们也可以配合厂家组织的相关技术培训和技术服务,提高Elisa试剂盒操作的水平。