生乳
体细胞
01
显微镜法
1.1原理
将测试的生鲜牛乳涂抹在载玻片上成样膜，干燥，染色，显微镜下对细胞核可被亚甲基蓝清晰染色的细胞计数。
1.2仪器和试剂
（1）仪器
显微镜：放大倍数╳500或╳1000，带刻度目镜、测微尺和机械台；微量注射器；载玻片；水浴锅；电炉；砂芯漏斗；吹风机；恒温箱。
（2）试剂
95%的乙醇，四氯乙烷或三氯乙烷，亚甲基蓝，冰醋酸，硼酸。
1.3染色液准备
在250毫升三角瓶中加入54毫升乙醇和40毫升四氯乙烷，摇匀。在65℃水浴锅中加热3分钟，取出后加入0.6克亚甲基蓝，混合均匀，降温后置于冰箱中冷藏。取出后，加入6毫升冰醋酸，混合均匀后用砂芯漏斗过滤，装置试剂瓶中，常温保存备用。
显微镜
1.4 样品的制备
（1） 采集的生乳应保存在2-6℃。若6小时内未测定，应加硼酸防腐。硼酸在样品中的浓度不大于0.6g/100mL。冷藏条件（2-6℃）下贮存不超过24小时。
（2） 将生乳在35℃水浴锅中加热5分钟，混匀后冷却至室温，防止脂肪上浮等样品不均匀对测定结果产生干扰。
（3） 用乙醇将载玻片清洗后，用镜头纸擦干，火焰烤干，冷却至室温。
（4） 用微量注射剂抽取0.01毫升样品，将样品平整的注射在外围的载玻片上，立即置于恒温箱中，水平放置5分钟，形成均匀厚度样膜。在电炉上烤干，将载破片上干燥样膜浸入染色溶液中10分钟，取出后晾干。将染色的样膜浸入水中洗去剩余的染色溶液，干燥后防尘保存。
1.5样品的测定
（1） 将载玻片固定在显微镜的载物台上，用自然光或为了增大透射光强度用电光源、聚光镜头，油浸高倍镜。
（2） 单向移动机械台对逐个视野中载玻片上染色体细胞计数，明显落在视野内或在视野内一半以上形体的体细胞被用于计数，计数的体细胞不得少于400个。（具体可参考NY/T 800-2004）
02
CMT诊断液
CMT主要应用于泌乳奶牛隐性乳房炎的快速诊断、泌乳奶牛乳房健康状况的常规监测、泌乳牛群隐性乳房炎发病情况普查及鲜奶卫生质量等级的评定。
其原理是在表面活性物质和碱性药物作用下，乳中体细胞被破坏，释放出DNA，进一步作用，使乳汁产生沉淀或形成凝胶。体细胞数越多，产生的沉淀或凝胶也越多，从而间接诊断乳房炎和炎症的程度。该法是国际通用的隐性乳房炎诊断方法，其特点是简便、快速。
CMT乳房炎筛查
2.1使用方法
（1）采样采自待检乳区，弃去前二把奶，将乳样分别挤在检验盘检验杯内。
（2）将检验盘倾斜（约60℃），弃去多余乳汁，检验杯内约留乳样2毫升。
（3）在每个检验杯内分别加入奶牛用诊断试剂（稀释液）2毫升。
（4）做水平同心圆摇动，摇动10-30秒，使乳样与奶牛用诊断试剂充分混合。
2.2判定标准
CMT与乳汁充分混合后，依据凝集物的有无和凝集物量的多少及性状进行判定。
阴性（-）：细胞数为0-20万/毫升：混合液呈液状，倾斜检验盘时，液体移动流畅，杯底无沉淀物。
可疑（±）：细胞数为15-50万/毫升：混合物呈液状，倾斜检验盘时，杯底出现微量沉淀物，稍加摇动，沉淀即刻消失。
弱阳性（+）：细胞数为40-150万/毫升：杯底出现少量稀薄粘性沉淀，但不成胶状，倾斜检验盘时，沉淀物散布于皿底，有一定粘附性。
阳性（++）：细胞数为80-500万/毫升：杯底沉淀物量较多，也较粘稠，并有少量胶状物，倾斜检验盘时，沉淀物有明显粘附于杯底而难以流动现象，旋转摇动时，沉淀物有聚中心现象。
强阳性（+++）：细胞数为500万以上/毫升：皿内混合物的大部分或全部形成明显胶状凝聚物，几乎完全粘附于皿底，旋转检验盘时，凝聚物聚中呈团状难以散开。
酸性乳（y）：乳汁呈黄色、酸败，为乳房炎。
碱性乳（P）：乳汁呈深紫色，同时伴有奶产量减少的现象，为乳房炎；乳中掺碱时，乳汁易呈深紫色。
03
电导率法
牛乳的电导率与成分，特别是氯离子和乳糖含量有关。当乳中氯离子含量升高或乳糖含量减少时，该乳的电导率增大。
正常乳的电导率在20℃时，一般为0.004-0.005S，超过0.006S即可认为是病牛乳。
电导率乳房炎测定仪
由于乳中含有盐类，因此具有导电性。乳中离子的数量会影响电导率，其中影响最大的是钠、钾、氯离子。
当牛乳酸败或患乳房炎乳由于产生乳酸或盐含量增加，电导率要高于常乳。故可利用电导率来间接检验乳房炎乳。
04
粘度法
牛乳的黏度在20℃时为0.0015-0.0020Pa.s。影响牛乳黏度的内在因素是牛乳中脂肪和蛋白质的含量。脂肪、蛋白质的含量高，则牛乳的黏度也高。干物质含量越高，乳的黏度越大。受脱脂、杀菌、均质处理等影响。
MILKANA体细胞检测仪
同时，牛乳的黏度也受温度的影响，温度升高则黏度降低。温度低于60℃时，温度越高，黏度越小；高于60℃时，蛋白质变性，温度越高，黏度越大。
另外，牛初乳、末乳、病牛乳的黏度均比正常乳要高。故可通过检测粘度来间接反映体细胞数量的多少。
05
荧光光电计数法
5.1工作原理：
对生乳中的体细胞进行荧光染色，特殊的荧光下经过一系列的镜片和滤光片处理后，投射到镜头里，之后对样品拍照、读数、分析和显示结果。
milkCELL100体细胞计数仪
拍照
其特点如下：
（1） 可操作性强：操作简单，使用方便，结果准确，操作人员经过简单的培训即可上岗操作。
（2） 安全性：一次性微流控芯片，减少交叉污染的风险。
（3） 图像显示：实时显示体细胞分布图像。
（4） 配套软件：仪器内置统计软件，自动储存、分析检测数据。
06
流式细胞计数仪
流式细胞术（flow cytometery, FCM）是20世纪70年代发展起来的一种可以快速、准确、客观，可同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术。乳品行业主要用流式细胞仪来检测牛乳中的体细胞和细菌总数。
流式细胞仪是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术为一体的新型高科技仪器。
其结构一般分为3部分：样品室及液流驱动系统；激光光源及光学系统；信号检测、储存、数据处理系统。
流式细胞术
流式细胞仪的分析原理：经过染色液染色的样品溶液通过样品管被压进喷嘴的中央，同时无细胞的鞘液也被压入喷嘴，形成包绕细胞的鞘液流，使细胞以单列进入样品室，与水平方向的激光光束（波长488nm）垂直相交。
稳定的液流推进装置使样品呈单列，每个细胞以均等的时间依次通过激光照射区，被荧光染色的细胞受照射后，产生两种信号，一种是散射光信号，又分为前向散射光（Forward scatter,FSC），一般与细胞体积的大小呈正比；侧向散射光（Side scatter,SSC），与细胞的颗粒度和复杂性有关。
另一种为荧光信号，发射的荧光与结合位点呈正比。不同类型的光信号被相应的光学检测器接收。光信号经过电学系统采集，转变为电学信号，经软件处理，得出检测结果。
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